文献类型：专利

中文题名：鸡外周血单核淋巴细胞PD-1重组质粒的构建、基因丰度实时检测方法及其应用

作者：王选年[1];孙国鹏[1];王爱国[1];朱艳平[1];张艳芳[1];岳锋[1];李鹏[1];张万方[1];李博文[1];杨媛[1];阮涛[1];王军[1];

第一作者：王选年

机构：[1]新乡学院;

第一机构：新乡学院

专利类型：发明专利

申请号：CN201410037329.5

申请日：20140126

申请人地址：453003 河南省新乡市红旗区金穗大道东段

公开日：20140514

代理人：张爱军

代理机构：41122 郑州市华翔专利代理事务所(普通合伙)

语种：中文

中文关键词：目的基因片段;淋巴细胞;实时检测方法;标准曲线;重组质粒;总RNA;基因;琼脂糖凝胶电泳;分子病理学;免疫学技术;标准品质;阳性质粒;荧光信号;普通PCR;反转录;血单核;雏鸡;检测;拷贝;扩增;外周;绘制;克隆;采集;筛选;细胞;回收;连接;转化;分析

摘要：本发明属于分子病理学与免疫学技术领域，具体涉及鸡外周血单核淋巴细胞PD-1重组质粒的构建、基因丰度实时检测方法及其应用。通过采集雏鸡淋巴细胞的总RNA，将总RNA反转录成cDNA；采用普通PCR扩增PD-1目的基因片段，经琼脂糖凝胶电泳检测，并回收纯化；将PD-1目的基因片段与pMD18-T载体连接，转化至感受态细胞DH5α中，提取重组质粒；经克隆筛选后进行测序分析，选取与目的基因片段相同序列的阳性质粒作为标准品质粒，按拷贝浓度绘制成标准曲线；根据荧光信号变化及标准曲线测出PD-1的基因丰度。本发明的PD-1基因丰度实时检测方法具有检测通量高、敏感性高、特异性强、操作简便、成本低及定量准确等优点。