文献类型：期刊文献

中文题名：猪圆环病毒2型荧光定量PCR检测方法的建立

英文题名：Rapid Detection of Porcine Circovirus Type 2 Using a SYBR Green Ⅰ Real-time PCR

作者：李鹏[1,2];郭军庆[1];金前跃[1];李青梅[1];李清州[3];万博[1];王选年[2];王川庆[4];张改平[4]

第一作者：李鹏

机构：[1]河南省农业科学院,农业部动物免疫学重点实验室,河南省动物免疫学重点实验室;[2]新乡学院生命科学与技术系生物技术研究中心;[3]河南省农业科学院农业经济与信息研究所;[4]河南农业大学牧医工程学院

第一机构：河南省农业科学院,农业部动物免疫学重点实验室,河南省动物免疫学重点实验室,河南郑州450002

年份：2014

卷号：29

期号：2

起止页码：66-70

中文期刊名：华北农学报

外文期刊名：Acta Agriculturae Boreali-Sinica

收录：CSTPCD;;北大核心:【北大核心2011】；CSCD:【CSCD2013_2014】；

基金：中国博士后科学基金项目(2011M501179);河南省教育厅科学技术研究重点项目(13A230838)

语种：中文

中文关键词：猪圆环病毒2型;SYBR;GreenⅠ;荧光定量PCR

外文关键词：Porcine circovirus type 2; SYBR Green Ⅰ; Real-time PCR

摘要：根据PCV2 ORF1设计1对特异性引物,建立了SYBR GreenⅠReal-time PCR检测方法。该方法灵敏度可达10-100拷贝/μL,比常规PCR检测方法灵敏度高10倍,而与猪繁殖和呼吸综合征病毒（PRRSV）、猪伪狂犬病毒（PRV）、猪瘟病毒（CSFV）以及猪细小病毒（PPV）没有交叉反应,利用该方法从50份临床病料中检测出43份阳性PCV2病毒,阳性检出率为94%。与常规PCR比较结果显示,该方法具有较高的灵敏度和特异性,能够快速检测和监控PCV2的感染流行。
Porcine circovirus type 2（ PCV2） is the causative factor of Post-weaning multi-systemic wasting syndrome（ PMWS） in pigs. Rapid detection of PCV2 is very important for the effective prophylaxis and treatment of PMWS. To establish a sensitive,specific assay for the detection and quantitation of PCV2,we designed and synthesized specific primers in the open reading frame 1（ ORF1）,and to develop a SYBR Green ⅠReal-time PCR. The results indicated that the Real-time PCR assay could detect 10- 100 copies of the genomic DNA per reaction,and its sensitivity was 10 times of the conventional PCR. The assay did not cross-react with classical swine fever virus（ CSFV）,porcine parvovirus（ PPV）,porcine reproductive and respiratory syndrome virus（ PRRSV） and pseudorabies virus（ PRV）. The limits of detection and quantitation were 10 and 100 copies,respectively. Using the established Real-time PCR system,43 of the 50 samples we tested were detected as positive. In conclusion,the Real-time PCR assay is sensitive,specific,accurate and can be used for the monitoring of PCV2 infection.